\

Фазоконтрастная и люминесцентная микроскопия в гинекологии

Цитологическая диагностика заболеваний шейки матки

Цитологическое исследование мазков из шейки матки позволяет оценить состояние слизистой оболочки, наличие или отсутствие признаков патологических процессов (реактивных, предопухолевых, опухолей). При выявлении другими лабораторными методами инфекционного агента (вирус папилломы человека, бактериальные и паразитарные инфекции), цитологический метод позволяет оценить реакцию организма на инфекционный агент, наличие или отсутствие признаков повреждения, пролиферации, метаплазии или трансформации эпителия. Возможно также при исследовании мазка определить причину изменений эпителия (наличие воспаления с ориентировочным или уверенным определением патогенной микробиоты (микрофлоры), патологических процессов, связанных с гормональным, лекарственным, механическим, лучевым воздействием на организм женщины и шейку матки, состояний, чреватых опасностью возникновения дисплазии и рака шейки матки, а при их развитии установить правильный диагноз. В связи с этим цитологическое исследование применяют как при скрининге (мазки с визуально нормальной шейки матки), так и при наличии видимых при гинекологическом осмотре изменений слизистой оболочки.

Получение материала

Рак шейки матки чаще всего развивается в зоне трансформации, ему предшествуют фоновые процессы и внутриэпителиальные поражения (дисплазия эпителия), которые могут располагаться на небольших участках, поэтому важно, чтобы материал был получен со всей поверхности шейки матки, особенно из зоны стыка плоского и цилиндрического эпителия. Число измененных клеток в мазке бывает различным, и если их мало, то увеличивается вероятность, что патологические изменения могут быть пропущены при просмотре препарата. Для эффективного цитологического исследования необходимо учитывать:

  • при профилактических осмотрах цитологические мазки следует брать у женщин независимо от жалоб, наличия или отсутствия изменений слизистой оболочки. Цитологическое исследование следует повторять не реже, чем раз в три года;
  • желательно получать мазки не ранее, чем на 5-е сутки менструального цикла и не позднее, чем за 5 суток до предполагаемого начала менструации;
  • нельзя брать материал в течение 48 ч после полового контакта, использования любрикантов, раствора уксуса или Люголя, тампонов или спермицидов, спринцевания, введения во влагалище медикаментов, свечей, кремов, в т. ч. кремов для выполнения ультразвукового исследования;
  • беременность – не лучшее время для скрининга, так как возможны неправильные результаты, но, если нет уверенности, что женщина придет на обследование после родов, лучше мазки взять;
  • при симптомах острой инфекции желательно получать мазки с целью обследования и выявления патологических изменений эпителия, этиологического агента; также необходим цитологический контроль после лечения, но не ранее, чем через 2 мес. после окончания курса.

Материал из шейки матки должен брать врач-гинеколог или (при скрининге, профилактическом осмотре) хорошо обученная медицинская сестра (акушерка).

Важно, чтобы в мазок попадал материал из зоны трансформации, так как около 90% опухолей исходит из зоны стыка плоского и цилиндрического эпителия и зоны трансформации и только 10% из цилиндрического эпителия цервикального канала.

С диагностической целью материал получают раздельно из эктоцервикса (влагалищной порции шейки матки) и эндоцервикса (цервикального канала) с помощью шпателя и специальной щетки (типа Cytobrush). При проведении профилактического осмотра используют Cervex-Brush, различные модификации шпателя Эйра и другие приспособления для получения материала одновременно из влагалищной части шейки матки, зоны стыка (трансформации) и цервикального канала.

Перед получением материала шейку матки обнажают в “зеркалах”, дополнительных манипуляций не проводят (шейку не смазывают, слизь не удаляют; если слизи много – ее аккуратно снимают ватным тампоном, не надавливая на шейку матки.). Щетку (шпатель Эйра) вводят в наружный зев шейки матки, осторожно направляя центральную часть приспособления по оси цервикального канала. Далее ее наконечник поворачивают на 360° (по часовой стрелке), достигая тем самым получения достаточного числа клеток из эктоцервикса и из зоны трансформации. Введение инструмента выполняют очень бережно, стараясь не повредить шейку матки. Затем щетку (шпатель) выводят из канала.

Приготовление препаратов

Перенос образца на предметное стекло (традиционный мазок) должен происходить быстро, без подсушивания и потери прилипших к инструменту слизи и клеток. Обязательно перенести на стекло материал с обеих сторон шпателя или щетки.

Если предполагается приготовление тонкослойного препарата с помощью метода жидкостной цитологии, головку щетки отсоединяют от ручки и помещают в контейнер со стабилизирующим раствором.

Фиксация мазков выполняется в зависимости от предполагаемого метода окрашивания.

Окрашивание по Папаниколау и гематоксилин-эозином наиболее информативны в оценке изменений эпителия шейки матки; любая модификация метода Романовского несколько уступает этим методам, однако при наличии опыта позволяет правильно оценить и характер патологических процессов в эпителии и микрофлору.

Клеточный состав мазков представлен слущенными клетками, находящимися на поверхности эпителиального пласта. При адекватном получении материала с поверхности слизистой оболочки шейки матки и из цервикального канала в мазок попадают клетки влагалищной порции шейки матки (многослойный плоский неороговевающий эпителий), зоны стыка или трансформации (цилиндрический и, при наличии плоскоклеточной метаплазии, метаплазированный эпителий) и клетки цервикального канала (цилиндрический эпителий). Условно клетки многослойного плоского неороговевающего эпителия принято делить на четыре типа: поверхностные, промежуточные, парабазальные, базальные. Чем лучше выражена способность эпителия к созреванию, тем более зрелые клетки попадают в мазок. При атрофических изменениях на поверхности эпителиального пласта расположены менее зрелые клетки.

Интерпретация результатов цитологического исследования

Наиболее распространенная в настоящее время – классификация Bethesda (The Bethesda System), разработанная в США в 1988 г, в которую вносили несколько изменений. Классификация создана для более эффективной передачи информации из лаборатории врачам клинических специальностей и обеспечения стандартизации лечения диагностированных нарушений, а также последующего наблюдения за больными.

В классификации Bethesda выделяют плоскоклеточные интраэпителиальные поражения низкой и высокой степени (squamous intraepithelial lesions of low grade and high grade – LSIL и HSIL) и инвазивный рак. Плоскоклеточные интраэпителиальные поражения низкой степени включают изменения, связанные с папилломавирусной инфекцией и слабой дисплазией (CIN I), высокой степени – умеренную дисплазию (CIN II), тяжелую дисплазию (CIN III) и внутриэпителиальный рак (cr in situ). В этой классификации имеются также указания на специфические инфекционные агенты, вызывающие заболевания, передавае мые половым путем.

Для обозначения клеточных изменений, которые трудно дифференцировать между реактивными состояниями и дисплазией предложен термин ASCUS – atypical squamous cells of undetermined significance (клетки плоского эпителия с атипией неясного значения). Для клинициста этот термин мало информативен, однако он нацеливает врача на то, что данная пациентка нуждается в обследовании и/или в динамическом наблюдении. В классификацию Bethesda в настоящее время введен также термин NILM – no intraepithelial lesion or malignancy, объединяющий норму, доброкачественные изменения, реактивные изменения.

Так как данные классификации используются в практике врача-цитолога, ниже приведены параллели между классификацией Bethesda и классификацией, распространенной в России (Табл. 22). Цитологическое стандартизованное заключениепо материалу из шейки матки (форма № 446/у), утверждено приказом Минздрава России от 24.04.2003 № 174.

Причины получения неполноценного материала различны, поэтому цитолог перечисляет типы клеток, обнаруженные в мазках и по возможности указывает причину, по которой материал признан неполноценным.

Фазово-контрастная микроскопия

Фазово-контрастная микроскопия в настоящее время позволяет изучать живые организмы, объекты, которые попросту неразличимы для визуализации с применением обычного оптического (светового) микроскопа.

Конечно же, такой тип микроскопии — это не единственное средство получить изображение при трудностях микроскопии объектов, однако, чтобы добиться их видимости при работе со световым микроскопом объект необходимо окрашивать, что неизменно ведет к гибели клеток.

Читайте также  Функциональные методы исследования болезней почек

Поэтому в отрасли микробиологии, при условиях, когда необходимо исследование живого объекта, фазово-контрастная микроскопия является неотъемлемой частью исследования.

Метод фазового контраста в микроскопии: история

В 1930 году немецким ученым Фрицем Цернике были начаты исследования в разрезе микроскопии, и именно в этот же год был разработан впервые фазово-контрастный метод исследования объектов. Однако, он был признан и внедрен далеко не сразу после его открытие. Только лишь в годы Второй Мировой войны был создан первый микроскоп, работающий по принципу фазового контраста. Их применение было связано в основном с областью медицины и биологии.

Устройство фазово контрастного микроскопа

Как устроен такой тип микроскопа?

У фазово-контрастного микроскопа самый обыкновенный конденсор меняется на конденсор с кольцевой диафрагмой, а объектив представлен линзами с фазовой пластиной. Когда происходит сдвиг фаз волны, имеющей название электромагнитной, переходит в контраст интенсивности.

Фазово контрастный микроскоп: принцип работы

Принцип фазово контрастной микроскопии:

  1. Свет от его источника проходит через исследуемые объекты, расположенные на предметном столике, рассеивается на две части: преломленный и непреломленный свет.
  2. Не преломленный свет данная фазовая пластина ослабляет, снижается его интенсивность. Преломленный же свет и вовсе не попадает на нее.
  3. Благодаря этому невидимые, неконтрастные микроорганизмы, незаметные при обычном микроскопировании в световом микроскопе, становятся высоко контрастными, и прекрасно визуализируются. Они могут наблюдаться темными на фоне светлого цвета, так называемый, позитивный фазовый контраст, а также, наоборот, негативный контраст, когда исследуемый объект выглядит светлым на темном фоне.

Фазовоконтрастная микроскопия: преимущества

Одним из наиболее важных преимуществ методики применения в микробиологии, медицине фазово-контрастной микроскопии является возможность исследования именно живых клеток и микроорганизмов. Совершенно исключена необходимость их связывания либо окрашивания, что приводит к гибели живой клетки. Именно за счет этого исследователи могут наблюдать не только клеточную структуру объекта, но и могут фиксировать динамические изменения биологических процессов, которые происходят на уровне исследуемого образца.

Фазовый контраст в микроскопе: наглядность результата

Для наглядности можно рассмотреть пример, в котором на оптическом и фазово-контрастном микроскопе изучается глиальная ткань головного мозга человека. Если сравнивать полученное изображение, то выводы может сделать любой человек, не имеющий образования ни в сфере медицины, ни в сфере физики. Наглядность результатов просто очевидна и неоспорима. При рассмотрении изображения, полученного при помощи оптического микроскопа, клетки головного мозга выглядят практически прозрачными, можно визуализировать только те нюансы клеточной структуры, которые обладают высоким коэффициентом преломления, например, ядра, мембрана. Конечная картинка оказывается высветленной и не пригодна для детального изучения исследуемого объекта. Что же касается того же объекта, который рассматривается с применением метода фазового контраста, то тут отличия видны без разъяснений картинка становиться четкой, контрастной, визуализируются самые мелкие структуры клеток, а также места их прикрепления друг к другу.

Возможности современных фазово-контрастных микроскопов теперь подкрепляются электронным усилением и возможностью обработки полученного изображения, что наделяет современное оборудование такого класса высокой производительностью.

Таким методом, как фазовоконтрастная микроскопия, можно воспользоваться на любом световом микроскопе. При необходимости проводить фазово-контрастную микроскопию компания ИНТЕРГЕН предоставляет возможность обратиться к нашим специалистам, которые помогут подобрать микроскоп, который также может выполнять исследования путем применения фазового контраста в сочетании с иными основными характеристиками оборудования.

Азы и особенности фазово контрастной микроскопии

Любой световой микроскоп может работать при использовании метода фазового контраста. Это обеспечивается путем незначительного переоборудования некоторых деталей устройства.

  1. Первое, что необходимо сделать с обыкновенным светлопольным микроскопом – это сменить тот самый светлопольный конденсор, который никак не позволяет использовать метод фазового контраста.
  2. На его место устанавливается тот самый фазово-контрастный конденсор. В окошке обязательно должно стоять обозначение «0». Что касается диафрагмы конденсора, то она должна быть открыта.
  3. Специалистом должен уже быть подготовлен препарат, который будет изучаться фазово-контрастным методом. Что немаловажно, препарат готовится нативный, то есть, живой, без применения красителей. Именно этот момент является превалирующим в изучении прозрачных объектов, которые невозможно рассмотреть без окрашивания путем применения светового, оптического микроскопа.
  4. Обычный окуляр также меняется.
  5. Препарат перемещают на предметное стекло, настраивают осветитель, производят фокусировку объекта при помощи объектива, который необходим для достаточного увеличения.
  6. Специалист вращает револьвер конденсора, в результате чего в окошке появляется значение, соответствующее увеличению объектива.
  7. Далее происходит центрирование кольцевой диафрагмы для совмещения с фазовым кольцом.
  8. Далее опять происходит смена окуляра на обычный, фокусировка и собственно наблюдение препарата.

В медицине широко применяется фазово-контрастная микроскопия в лабораторной диагностике. Фазово-контрастная микроскопия применяется в следующих исследованиях:

  • Метод фазового контраста применяется при подсчете количество тромбоцитов при проведении клинического анализа крови. Это крайне важное исследование, от результатов которого зависит жизнь, здоровье и выработка дальнейшей тактики ведения пациентов со стороны врачей. Ведь снижение количества тромбоцитов есть большой риск возникновения кровотечений.
  • Визуализация и подсчет эритроцитов в моче. Важный момент проведения клинического анализа мочи. При визуализации и подсчете эритроцитов в моче, что в клинической практике имеет название гематурии, можно заподозрить довольно угрожающие жизни патологии почек, как, например, гломерулонефрит, острая почечная недостаточность. Важным моментом является то, что при помощи фазово-контрастной микроскопии есть возможность дифференциации измененных и неизмененных эритроцитов, так как это крайне важный факт для установки клинического диагноза. При идентификации в моче измененных эритроцитов врачам становится понятно, что причины такой гематурии кроются в области самих почек. А если эритроциты выявляются неизмененные, тогда кровотечение исходит из нижних мочевыводящих путей.
  • Также метод фазового контраста широко применяется в бактериологических лабораториях, где проводятся исследования биологических сред, в которых путем микроскопирования фазово-контрастным методом проводится идентификация бактериальной флоры после посева различных биологических жидкостей на питательные среды в условиях лаборатории. Именно от того, какая именно бактерия идентифицируется, зависит напрямую тактика лечения и назначение конкретных групп антибактериальных препаратов, к которым чувствителен именно этот определенный микроорганизм.

Это далеко не все сферы науки, где используется фазово-контрастный микроскоп в настоящее время. Приобретая микроскоп с возможностью применения метода фазового контраста, стоит обращаться только в проверенные магазины, предоставляющие только качественное оборудование с предоставлением гарантии и сервиса.

Фазоконтрастная и люминесцентная микроскопия в гинекологии

Методы исследования в гистологии включают приготовление гистологических препаратов и их изучение с помощью световых или электронных микроскопов. Гистологические препараты представляют собой мазки, отпечатки органов, пленочные препараты, тонкие срезы кусочков органов, окрашенные тем или иным красителем (исследуются также нативные — неокрашенные срезы), помещенные на предметное стекло, заключенные в бальзам и покрытые тонким покровным стеклом.

Для изготовления гистологического препарата необходимо после взятия материала произвести его фиксацию в том или ином фиксаторе (формалине, спирте, а для электронной микроскопии — в глутаровом альдегиде и четырехокиси осмия). Делается это для предотвращения процессов аутолиза и сохранения структуры органа, близкой к прижизненной. Далее следуют этапы обезвоживания кусочка органа в спиртах возрастающей концентрации и в ксилоле с целью уплотнения тканей, что необходимо для изготовления тонких срезов. Для придания кусочку органа еще большей плотности и гомогенности, обеспечивающей высококачественную резку, проводят его заливку в органическую среду — парафин, целлоидин (для световой микроскопии) и органические смолы (эпон, аралдит, дуркупан) — для электронно-микроскопического исследования.

Читайте также  Безопасный и надежный приворот мужчины

Существуют также физические способы фиксации материала, наиболее распространенным из которых является быстрое замораживание кусочка органа с помощью жидко.го азота и других средств. Для резки замороженного материала используют специальные приборы — криостаты, или замораживающие микротомы.

Толщина срезов, предназначенных для световой микроскопии, не должна превышать 4-5 мкм, для электронной — 50-60 нм (такие ультратонкие срезы изготавливают на специальном приборе ультратоме, используя стеклянные или алмазные ножи и автоматический режим резки).

После получения срезов их помещают на предметные стекла, далее следуют этапы освобождения срезов от заливочной среды (при световой микроскопии) и окраски для придания срезам контрастности. Среди гистологических красителей наиболее часто употребляется сочетание гематоксилина, маркирующего ядро (кислотные молекулы), и эозина, избирательно окрашивающего белковые молекулы (цитоплазматический краситель).

По окончании окрашивания срезы заключают в консервирующие среды (канадский, кедровый бальзамы) и накрываются покровным стеклом.

Основным методом гистологического исследования клеток, тканей и органов является световая микроскопия. В световом микроскопе для освещения объекта используются лучи видимого спектра. Современные световые микроскопы позволяют получать разрешение порядка 0,2 мкм (разрешающая способность микроскопа — это то наименьшее расстояние, при котором две рядом расположенные точки видны как отдельные). Разновидности световой микроскопии — фазово-контрастная, интерференционная, поляризационная, темнопольная и др.

Фазово-контрастная микроскопия — метод изучения клеток в световом микроскопе, снабженном фазово-контрастным устройством. Благодаря смещению фаз световых волн в микроскопе такой конструкции повышается контрастность структур исследуемого объекта, что позволяет изучать живые клетки.

Интерференционная микроскопия. В интерференционном микроскопе падающие на объект световые пучки раздваиваются — один пучок проходит через объект, другой — идет мимо. При последующем воссоединении пучков возникает интерференционное изображение объекта. По сдвигу фаз одного пучка относительно другого можно судить о концентрациях различных веществ в исследуемом объекте.

Поляризационная микроскопия. В микроскопах этого типа световой пучок разлагается на два луча, поляризованных во взаимно перпендикулярных плоскостях. Проходя через структуры ткани со строгой ориентацией молекул, лучи запаздывают друг относительно друга вследствие неодинакового их преломления. Возникающий при этом сдвиг фаз является показателем двойного лучепреломления клеточных структур (таким способом были исследованы, например, миофибриллы).

Фазоконтрастная и люминесцентная микроскопия в гинекологии

Микроскопия – это изучение объектов и элементов чрезвычайно малых размеров. Человеческий глаз имеет предел разрешения и детализации таких объектов, диктуемый его природными свойствами. Для преодоления этого биологического ограничения используются различные приборы-микроскопы. На сегодняшний день, одним из ведущих методов исследования микрообъектов в биологических науках является оптическая (она же световая) микроскопия. Световые микроскопы являются важнейшими инструментами как при проведение некоторых рутинных медицинских анализов, так и в биологических и медико-биологических научных исследованиях. Они незаменимы при изучении морфологических свойств микробиологических объектов, к которым относятся насекомые и их части, многие паразиты, клетки растений и животных, простейшие и бактерии. Возможность изучения топографии, морфологии, ультраструктуры позволило человеку значительно расширить свои знания о микроорганизмах. В медицине, микроскопы позволяют проводить подсчёт клеток крови, анализ биопсий на структуру, морфологию и наличие определённых включений. С применением молекулярно-биологических техник, появилась возможность выявить локализацию отдельных химических веществ.

Сущность оптических методов

Современная световая микроскопия обеспечивает увеличение до 2–3 тысяч раз, что является достаточным для изучения различных форм жизни на клеточном уровне и других биологических объектов [1, 2]. Основными характеристиками любого микроскопа являются разрешающая способность и контраст. Разрешающая способность – минимальное расстояние, на котором находятся две точки, различаемые как раздельные объекты. Контраст –возможность различать объекты и отдельные детали от их фона. Если различие в яркости объекта и фона составляет менее 3 – 4 %, то его невозможно различить, даже если оптика микроскопа теоретически способна разрешить его детали. На контраст влияют как свойства объекта, которые изменяют световой поток по сравнению с фоном, так и способности оптики прибора уловить возникающие различия в свойствах луча. Главным ограничением для возможностей светового микроскопа является волновая природа света, которое не позволяет увидеть объекты, размеры которых сопоставимы с волновой длиной электромагнитного излучения светового диапазона, т.е. меньше 1 микрометра.

Для различных нужд создаются оптические системы различной конструкции [3, 4]:

Прямой микроскоп является наиболее часто встречаемой конструкцией. Такая схема используется чаще всего при изучение прозрачных и полупрозрачных микрообъектов размеров, сопоставимых с клетками. Лабораторные микроскопы особенно широко применяются в различных областях биологии (ботанике, микробиологии, цитологии) и медицины (обычно это микробиологический и гистологический анализ материала).

Инвертированная схема микроскопа отличается от прямой тем, что в ней объективы находятся не над, а под исследуемым предметом. Это позволяет оптимизировать конструкцию инструмента для работы с достаточно большими по своему объему объектами, вроде флаконов для культивирования клеток. В зависимости от назначения и особенностей конструкции, инвертированные микроскопы могут быть биологическими, люминесцентными, металлографическими и др. Подобные приборы широко используются при различных научных и лабораторных исследованиях в микробиологии и медицине.

Стереоскопические или стереомикроскопы имеют в своей конструкции два расположенных под углом объектива, и благодаря этому позволяют получать стереоскопическое изображение исследуемого объекта. Стереомикроскопы обладают существенно большей глубиной резкости, чем обычные, что позволяет использовать их для изучения относительно крупных и выпуклых микрообъектов – таких как части растений, грибов, колонии микроорганизмов. Выделяют два типа конструкции световых микроскопов: схема Грену и оптическая система с общим главным объективом.

Светлопольная микроскопия позволяет исследовать объекты в проходящем свете в светлом поле [2,5]. Данный вид микроскопии предназначен для исследования морфологии, размеров клеток, их взаимного расположения, структурной организации клеток и других особенностей. У светового микроскопа максимальная разрешающая способность составляет 0,2 мкм, что обеспечивает высокоточное увеличение микроскопа до 1500х.

Фазово-контрастная микроскопия (рис. 1) используется для получения высококонтрастных изображений прозрачных образцов, таких как живые клетки, микроорганизмы, тонкие кусочки ткани, литографические узоры, волокна, латексные дисперсии, осколки стекла и субклеточные частицы, включая ядра и другие органеллы. Метод контраста участка использует оптический механизм для того, чтобы перевести мельчайшие изменения в участке в соответствующие изменения в амплитуде, которые можно визуализировать как разницы в контрасте изображения. Одно из главных преимуществ микроскопии контраста участка в том, что живущие клетки можно рассмотреть в их естественном положении, без предварительного убийства. В результате динамика протекающих биологических процессов может наблюдаться и регистрироваться в высоком контрасте, с высокой четкостью мельчайших деталей образца.

Чтобы хорошо визуализировать эти биологические материалы, они должны иметь контраст, вызванный надлежащими показателями преломления, или окраску. Поскольку красители обычно токсичны, для достижения контраста может использоваться темная поляризационная микроскопия [2, 6]. В темнопольной микроскопии конденсатор предназначен для формирования «полого» конуса света (рис. 2). В темной микроскопии объектив находится в темной полости этого конуса, а свет распространяется вокруг объектива, но не входит в зону конуса. Все поле зрения кажется темным, но когда на предметный столик помещается образец, он кажется ярким на темном фоне. Он похож на заднее освещение объекта, который может быть того же цвета, что и фон, на котором он сидит, – чтобы он выделялся. Темнопольная микрокопия позволяет увидеть объекты, величина которых измеряется сотыми долями микрометра, что находится за пределами разрешающей способности обычного светлопольного микроскопа. Однако наблюдение за объектами в темном поле позволяет исследовать только контуры клеток и не дает возможности рассмотреть их внутреннюю структуру.

Читайте также  Какие 3 опоры помогут пережить развод

Рис. 1. Интернет: Stormoff, stormoff.ru, 2018

Рис. 2. Интернет: Studopedia, studopedia.ru, 2018

Лазерная конфокальная микроскопия

Конфокальная микроскопия (рис. 3) обладает такими особенностями, как контролируемая глубина резкости, устранение шумов вне фокуса и возможность сбора последовательных оптических секций из толстых образцов [5]. Конфокальная микроскопия основана на использовании пространственной фильтрации для устранения света вне фокуса и вспышки в образцах, которые толще плоскости фокусировки. Когда флуоресцентные образцы визуализируются с использованием обычного широкополосного оптического микроскопа, вторичная флуоресценция, испускаемая образцом вдали от интересующей области, часто мешает разрешению тех объектов, которые находятся в фокусе. Конфокальный метод визуализации обеспечивает незначительное улучшение как в осевом, так и в поперечном разрешении, но также обладает способностью исключить из изображения вспышку «вторичную флуоресценцию», которая возникает в густых флуоресцентно меченых образцах. Эта особенность вызвала большой рост популярности конфокальных микроскопов. Освещение достигается путем сканирования одного или нескольких фокусированных лучей света, обычно от лазера. Изображения, полученные путем сканирования образца таким образом, называются оптическими сечениями.

Рис. 3. Интернет: 5fan, 5fan.ru, 2018

Мультифотонная микроскопия схожа с конфокальной и обеспечивает четкие преимущества для трехмерной визуализации [6]. Она хорошо подходит для визуализации живых клеток, особенно в интактных тканях, таких как срезы мозга, эмбрионы, а так же целые органы или небольшие организмы. Эффективная чувствительность флуоресцентной микроскопии, особенно при работе с толстыми образцами, как правило, ограничена вспышкой без фокуса. Это ограничение значительно сокращается в конфокальном микроскопе, с помощью конфокального отверстия для отклонения фоновой флуоресценции фокуса и получения несжатых оптических секций менее 1 микрометра. Мультифотонная микроскопия имеет преимущества: 1. Вследствие значительно меньшего поглощения тканей и клеток в ИК – области по сравнению с УФ, уменьшается повреждение живых клеток фотоиндуцированными процессами. 2. Достигается большая глубина проникновения излучения в биологические объекты. 3. Отсутствует возбуждение и выцветание флуорохромов вне фокального микрообъема, поэтому конфокальная диафрагма не требуется.

Эпоха, когда оптическая микроскопия была чисто описательным инструментом прошла. В настоящее время формирование оптического изображения является лишь первым шагом к анализу данных. Микроскоп выполняет этот первый шаг в сочетании с электронными детекторами, процессорами изображений и устройствами отображения, которые можно рассматривать как расширения системы формирования изображения. Компьютеризированное управление фокусом, сценическим положением, оптическими компонентами, ставнями, фильтрами и детекторами широко распространено и позволяет проводить экспериментальные манипуляции, которые невозможны для человека при использовании механических микроскопов. Возрастающее применение электрооптики в флуоресцентной микроскопии привело к созданию оптических пинцетов, способных манипулировать субклеточными структурами или частицами, изображениями отдельных молекул и широким спектром сложных спектроскопических приложений.

Сдать анализ на цитологическое исследование по системе Бетесда

Исследуемый биоматериал Соскоб из экзо/эндоцервикса
Метод исследования световая микроскопия
Cрок исполнения с момента поступления биоматериала в лабораторию 2 к.д.

Описание

ПАП-тест, или цитологическое исследование мазков из экзо- и эндоцервикса методом Папаниколау, является скрининговым методом диагностики патологии шейки матки. Данный вид цитологического исследования рекомендован большинством сообществ и входит в современные клинические рекомендации. В рамках настоящего анализа ПАП-тест проводится классическим методом, а именно материал наносится на стекло. Забор мазков проводит врач, используя специальные эндобраши (цитощеточки) для изолированного получения мазков с поверхности шейки матки (экзоцервикс) и из цервикального канала. Мазки наносятся на стекло, которое в дальнейшем будет направлено врачам-цитологам для оценки полученного материала. Метод Папаниколау является наиболее точным исследованием клеток экзо- и эндоцервикса. В отличие от других методов используется несколько сложных красок для лучшего окрашивание цитоплазмы и ядер. Также мазок фиксирует 96% спиртом. Такая методика позволяет снизить количество ошибок, допущенных из-за недостаточной подготовки материала непосредственно к исследованию, а также дает возможность цитологам оценить максимально окрашенный материал. Описание цитограммы при этом всегда развернутое, а заключение согласно существующей классификации Бетесда.

Классификация Бетесда.

Оценка качества мазка:
Материал полноценный, содержит клетки плоского и цилиндрического эпителия в достаточном количестве.

Неудовлетворительный для оценки (неинформативный) материал, Скудное количество клеток или их отсутствие.

Цитограмма в пределах нормы (NILM):
Содержит клетки поверхностного и промежуточного слоев многослойного плоского эпителия, клетки метаплазированного эпителия, лейкоциты, клетки цилиндрического эпителия, клетки эпителия эндометрия.

Метаплазия (норма), клетки плоского метаплазированного эпителия свидетельствуют о том, что материал забран из зоны трансформации.

Реактивные изменения:
Цитограмма воспаления, дегенеративные и реактивные изменения клеток, воспалительная атипия, плоскоклеточная метаплазия, гиперкератоз, паракератоз, койлоцитоз и другие признаки вирусного поражения.

Атрофия, клетки базального и парабазального типов -мелкие клетки с гиперхромным ядром и скудной цитоплазмой. Часто могут ошибочно трактоваться как клетки с атипией, давая ложноположительный результат цитологии.

Патологические изменения эпителия:
ASCUS (atypical squmous cells of undetermined significance), Изменения, которые трудно дифференцировать между реактивными изменениями эпителия и дисплазией. При ASCUS определяются клетки, трактовка которых затруднена — клетки с дискариозом, укрупненными и гиперхромными ядрами. Рекомендуется динамическое наблюдение и дообследование, а именно повторное цитологическое исследование через 6 месяцев и ВПЧ-тестирование. В случае подтверждении ASCUS и наличии вируса папилломы человека высокого онкогенного риска — проводится кольпоскопия. Исследования показывают, что 20% женщин с ASC имеют дисплазию после более тщательного обследования.

Предопухолевые изменения:
LSIL (CIN I), слабовыраженное интраэпителиальное поражение, включающее папилломавирусную инфекцию. Рекомендуется наблюдение без активной терапии. У большинства женщин LSIL самостоятельно регрессирует в течение нескольких лет. В эту группу объединены все изменения с низким злокачественным потенциалом, поскольку цитолог зачастую не может отличить изменения при ВПЧ инфекции и CIN 1.

HSIL (CIN II-III), умеренно выраженное и тяжелое интраэпителиальное поражение. Рекомендуется удаление всех пораженных тканей методом (конизация) с последующим морфологическим исследованием. В эту группу объединены все изменения с высоким злокачественным потенциалом.

AGC (atypical glandular cells), Атипические клетки цилиндрического эпителия. Рекомендуется выскабливание цервикального канала для гистологического исследования.

Опухолевые изменения:
Плоскоклеточный рак, злокачественная опухоль из плоского эпителия.

Железистый рак, злокачественная опухоль из железистого эпителия эндоцервикального типа.

Эндометриальный рак, злокачественная опухоль, развивающаяся из слизистой оболочки матки и прорастающая в цервикальный канал.

Подготовка

У женщин репродуктивного возраста рекомендуется забирать мазки не ранее, чем на 5-й день менструального цикла и не позднее, чем за 5 дней до предполагаемого начала менструации.

Показания

  • В рамках ежегодного обследования шейки матки.
  • При наличии изменений на шейке матки чаще, чем 1 раз в год — например, 1 раз в 6 месяцев при наличии ВПЧ или слабой степени дисплазии.
  • Повторное исследование при выявлении признаков воспаления, реактивных изменений, CIN 1 после проведенного курса терапии.

Интерпретация результата

Результаты лабораторных исследований не являются единственным критерием, учитываемым лечащим врачом при постановке диагноза и назначении соответствующего лечения, и должны рассматриваться в комплексе с данными анамнеза и результатами других возможных обследований, включая инструментальные методы диагностики.
В медицинской компании «LabQuest» Вы можете получить персональную консультацию врача службы «Doctor Q» по результатам исследований во время приема или по телефону.

Понравилась статья? Поделиться с друзьями:
Добавить комментарий

;-) :| :x :twisted: :smile: :shock: :sad: :roll: :razz: :oops: :o :mrgreen: :lol: :idea: :grin: :evil: :cry: :cool: :arrow: :???: :?: :!: